همانطور که گفتیم کروماتوگرافی مایع با فشار بالا یا HPLC (High Performance Liquid Chromatography) یکی از روش‌های تجزیه و تحلیل جدایی مواد مختلف در نمونه‌های مایع است. این روش بر اساس تفاوت‌ها در نیروی جاذبه بین مولکول‌ها و فازهای مختلف جداسازی اجزای مختلف بهترین است. نحوه کار این روش به شرح زیر می باشد:

۱) آماده‌سازی نمونه

نمونه مایع موردنظر باید آماده‌ سازی شود، شامل انتقال به حالت مایع از حالت جامد یا گازی، و شاید پس از آن فرآیندهایی مانند استخراج یا تمیزکاری انجام شود.

۲) تزریق نمونه

نمونه آماده‌سازی شده توسط یک سرنگ به سیستم کروماتوگرافی تزریق می‌شود.

۳) جداسازی

در ستون کروماتوگرافی، نمونه به یک ماتریس جاذبی مخصوص ارسال می‌شود. ماتریس جاذبی ممکن است یک فاز مایع (مثلاً فاز معکوس) یا یک فاز جامد (مثل ستون های پر پورت) باشد. در این مرحله، اجزای مختلف نمونه بر اساس تفاوت‌های در جذب یا تراوایی به طور متوالی جدا می‌شوند.

۴) تشخیص

اجزای جدا شده به ترتیب از ستون خارج می‌شوند و به دتکتورهای حساس ارسال می‌شوند که به تفاوت‌های در سیگنال‌هایی که تولید می‌کنند واکنش نشان می‌دهند.

۵) تحلیل داده‌ها

سیگنال‌های تولید شده توسط دتکتورها توسط نرم‌افزار مربوطه تحلیل می‌شوند و الگوی جداسازی و غلظت اجزای مختلف نمونه تعیین می‌شود.

کروماتوگرافی مایع HPLC به دلیل حساسیت بالا، قابلیت جداسازی عالی، و سرعت بالای آن در تجزیه و تحلیل مواد، به طور گسترده در صنایع شیمیایی، فارماسیوتیکال، غذایی، و بیوتکنولوژی مورد استفاده قرار می‌گیرد.