سیستم الکتروفورز و بلاتینگ Bio-Rad Criterion Blotter

سیستم Criterion Blotter نمایندگی  Bio-Rad یک سیستم انتقال الکتروفورتیک برای انتقال پروتئین‌ها و اسیدهای نوکلئیک از ژل‌های الکتروفورز به غشاهای بلاتینگ است. سیستم الکتروفورز به‌ طور خاص برای استفاده با ژل‌های پیش‌ساخته Criterion و همچنین ژل‌های دست‌ساز طراحی شده است.

 مشخصات دستگاه سیستم الکتروفورز و بلاتینگ Criterion Blotter

• ظرفیت انتقال: توانایی انتقال همزمان 2 ژل Criterion یا 4 ژل Mini-PROTEAN (چه دست‌ساز و چه پیش‌ساخته)

• ابعاد حداکثری ژل: 15 × 9.4 سانتی‌متر (عرض × طول)

• الکترودها: دارای الکترودهای با فاصله نزدیک که حداکثر قدرت میدان و انتقال کارآمد را ایجاد می‌کنند

• زمان انتقال: 30 دقیقه تا 1 ساعت برای بیشتر پروتئین‌ها (انتقال شبانه با ولتاژ پایین نیز امکان‌پذیر است)

• ابعاد دستگاه: 21.8 × 15 × 11.8 سانتی‌متر (عرض × ارتفاع × عمق)

• منبع تغذیه توصیه شده: PowerPac 200 Power Supply

کاربردهای سیستم Criterion Blotter

1. وسترن بلاتینگ: انتقال پروتئین‌ها از ژل به غشا برای تشخیص آنتی‌ژن‌های خاص

2. انتقال اسیدهای نوکلئیک: برای تکنیک‌های مانند نورترن بلاتینگ یا ساترن بلاتینگ

3. تکنیک‌های تخصصی:

   • تجزیه و تحلیل پپتیدها

   • فوکوسینگ ایزوالکتریک (IEF)

   • تجزیه و تحلیل پروتئازها توسط زایموگرام PAGE

   • جداسازی اسیدهای نوکلئیک دناتوره یا غیردناتوره

اجزای سیستم و ویژگی‌های عملکردی

• الکترودهای انتقال

سیستم در دو مدل با الکترودهای سیمی یا صفحه‌ای موجود است که الکترودهای صفحه‌ای انتقال یکنواخت‌تری ایجاد می‌کنند

• سیستم خنک‌ کننده

شامل یک عنصر یخ مهر و موم شده برای قرار دادن در تانک و همچنین یک سیم پیچ خنک‌کننده اختیاری

• سینی مونتاژ بلات

برای خیساندن فیلترها و پدها در بافر انتقال

• غلتک

برای حذف حباب‌های هوا از ساندویچ بلات

• حامل‌ های کاست

دو عدد کاست نگهدارنده برای نگه داشتن محکم ساندویچ بلات بدون اعمال فشار

ملاحظات فنی و نکات کاربردی سیستم الکتروفورز و بلاتینگ Criterion Blotter

• حجم بافر انتقال

نیاز به حجم زیادی از بافر انتقال حاوی حلال آلی (20% متانول) دارد (1.3 لیتر) که می‌تواند موجب تولید ضایعات آلی قابل توجهی شود.

• کنترل دما

استفاده از عنصر یخ در تانک حجم بافر را کمی کاهش می‌دهد و به کنترل دما کمک می‌کند.

• بهینه‌ سازی شرایط انتقال

برای پروتئین‌های غشایی که در حضور SDS بهتر جدا می‌شوند، می‌توان از کاست‌های خالی برای ساخت ژل‌های SDS پلی آکریل آمید استفاده کرد.

• ولتاژ بهینه

در برخی موارد مانند رسانه‌های گرادیان با ویسکوزیته بالا، اجرای ژل در ولتاژ پایین‌تر (100 ولت) نسبت به پیشنهاد Bio-Rad (200 ولت) ممکن است نتایج بهتری داشته باشد.

مزایای سیستم Criterion Blotter

• سیستم بدون نشت: طراحی خاص محفظه‌های بافر بالا و پایین باعث کاهش مصرف بافر و جلوگیری از نشت می‌شود

• انعطاف‌پذیری در بارگذاری نمونه: وجود شانه‌های مختلف با 1، 12، 18 و 26 خانه برای انعطاف‌پذیری در بارگذاری نمونه

• بارگذاری آسان نمونه: چاهک‌های بارگذاری نمونه شماره‌گذاری شده‌اند و می‌توان از راهنمای بارگذاری نمونه یا پیپت چندکاناله استفاده کرد

• انتقال کارآمد: انتقال پروتئین‌ها به ویژه با استفاده از بلاتر مجهز به الکترود صفحه‌ای بسیار کارآمد و یکنواخت است

معایب و محدودیت‌ها سیستم الکتروفورز و بلاتینگ Criterion Blotter

• مشکل در کاست‌های خالی: در برخی موارد شانه‌های ژل به طور دقیق در کاست‌های خالی قرار نمی‌گیرند که باعث تجمع پلی آکریل آمید پلیمریزه شده در چاهک‌ها می‌شود

• حجم بالای بافر: نیاز به حجم زیادی از بافر حاوی متانول برای انتقال پروتئین‌ها